腸出血性大腸埃希菌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)
發(fā)布時(shí)間：2014-3-8 9:02:14??????瀏覽次數(shù)：
大腸埃希菌是人和動(dòng)物腸道正常菌群的成員，但其中有些菌株能引起輕微腹瀉至嚴(yán)重腹瀉，有的菌株甚至能引起致死性并發(fā)癥如溶血性尿毒綜合征。依據(jù)不同的血清型別、毒力和所致臨床癥狀，可將致腹瀉的大腸埃希菌分為五類(lèi)，即腸致病性大腸埃希菌，腸產(chǎn)毒性大腸埃希菌，腸侵襲性大腸埃希菌，腸集聚性大腸埃希菌和腸出血性大腸埃希菌。引起腸道感染的大腸埃希菌與正常菌群中的大腸埃希菌在普通平板上的表現(xiàn)相似，分離培養(yǎng)后可通過(guò)血清分型，毒力檢測(cè)等加以鑒別。
腸出血性大腸桿菌（EHEC）因能引起人類(lèi)的出血性腸炎而得名，嚴(yán)重者可發(fā)展成溶血性尿毒綜合征(HUS)。EHEC最具代表性的血清型是0157:H7,但近年從腹瀉和HUS患者分離的非0157的血清型也日益增多。比如O126:H8,O111:H7，O26:H11等，已達(dá)100多個(gè)血清型。
0157:H7作為研究最為深入的EHEC代表菌株已經(jīng)具有比較成熟的分離培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。標(biāo)本采集主要為病人糞便標(biāo)本，以采集腹瀉病人血性水樣便為主。同時(shí)也可采集水、食品、環(huán)境標(biāo)本等。采集樣本后盡快送實(shí)驗(yàn)室按如下程序檢測(cè)
腸道正常菌群中的大腸埃希菌約80％可發(fā)酵山梨醇，但0157:H7不發(fā)酵（或緩慢發(fā)酵）山梨醇，利用這一特點(diǎn)可用山梨醇麥康凱培養(yǎng)基篩選不發(fā)酵山梨醇的菌落作為可疑菌落，再通過(guò)生化鑒定，血清分型以及毒力基因檢測(cè)作進(jìn)一步確認(rèn)。生化反應(yīng)可確認(rèn)可疑菌落為大腸埃希氏菌，血清學(xué)反應(yīng)可檢測(cè)出血性大腸埃希菌菌體抗原O157和鞭毛抗原H7。當(dāng)然這些還是不夠的我們還需要進(jìn)一步確定這些菌株攜帶毒力因子的情況，可使用PCR方法進(jìn)行。
但是通過(guò)以上的方法我們并不能鑒定非0157血清型的其他EHEC菌株，而這部分菌株所占的比例也是越來(lái)越重。對(duì)于這部分菌株我們可以在腸道選擇鑒別培養(yǎng)基上挑選疑為大腸埃希菌的菌落( EMB平板上呈扁平，粉紅色有金屬光澤；MAC平板上粉紅色或紅色；SS平板上為紅到粉紅色或中央為粉紅色周?chē)鸁o(wú)色的菌落；XLD平板上呈不透明黃色的菌落）。通過(guò)PCR方法檢測(cè)可疑菌落是否攜帶志賀毒素基因，對(duì)于攜帶志賀毒素的可疑菌落再通過(guò)生化反應(yīng)確定其為大腸埃希氏菌，血清學(xué)方法來(lái)確定它的血清型別。
腸出血性大腸桿菌（EHEC）因能引起人類(lèi)的出血性腸炎而得名，嚴(yán)重者可發(fā)展成溶血性尿毒綜合征(HUS)。EHEC最具代表性的血清型是0157:H7,但近年從腹瀉和HUS患者分離的非0157的血清型也日益增多。比如O126:H8,O111:H7，O26:H11等，已達(dá)100多個(gè)血清型。
0157:H7作為研究最為深入的EHEC代表菌株已經(jīng)具有比較成熟的分離培養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)。標(biāo)本采集主要為病人糞便標(biāo)本，以采集腹瀉病人血性水樣便為主。同時(shí)也可采集水、食品、環(huán)境標(biāo)本等。采集樣本后盡快送實(shí)驗(yàn)室按如下程序檢測(cè)
腸道正常菌群中的大腸埃希菌約80％可發(fā)酵山梨醇，但0157:H7不發(fā)酵（或緩慢發(fā)酵）山梨醇，利用這一特點(diǎn)可用山梨醇麥康凱培養(yǎng)基篩選不發(fā)酵山梨醇的菌落作為可疑菌落，再通過(guò)生化鑒定，血清分型以及毒力基因檢測(cè)作進(jìn)一步確認(rèn)。生化反應(yīng)可確認(rèn)可疑菌落為大腸埃希氏菌，血清學(xué)反應(yīng)可檢測(cè)出血性大腸埃希菌菌體抗原O157和鞭毛抗原H7。當(dāng)然這些還是不夠的我們還需要進(jìn)一步確定這些菌株攜帶毒力因子的情況，可使用PCR方法進(jìn)行。
但是通過(guò)以上的方法我們并不能鑒定非0157血清型的其他EHEC菌株，而這部分菌株所占的比例也是越來(lái)越重。對(duì)于這部分菌株我們可以在腸道選擇鑒別培養(yǎng)基上挑選疑為大腸埃希菌的菌落( EMB平板上呈扁平，粉紅色有金屬光澤；MAC平板上粉紅色或紅色；SS平板上為紅到粉紅色或中央為粉紅色周?chē)鸁o(wú)色的菌落；XLD平板上呈不透明黃色的菌落）。通過(guò)PCR方法檢測(cè)可疑菌落是否攜帶志賀毒素基因，對(duì)于攜帶志賀毒素的可疑菌落再通過(guò)生化反應(yīng)確定其為大腸埃希氏菌，血清學(xué)方法來(lái)確定它的血清型別。
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